Diferencia clave - Benzonase vs DNase
La degradación de los ácidos nucleicos es importante para muchas técnicas de biología molecular. Se utiliza ampliamente en la tecnología del ADN recombinante para eliminar fragmentos no deseados de ADN y ARN. Las enzimas que degradan los ácidos nucleicos se denominan nucleasas y pueden ser de diferentes tipos según la función requerida. Las nucleasas que degradan el ADN se conocen como DNasas, mientras que las que degradan el ARN se conocen como RNasas. Estas enzimas se utilizan principalmente en experimentos in vitro donde se llevan a cabo pruebas moleculares in vitro para aislar ADN, ARN o proteínas puros. Las benzonasas son un tipo de nucleasas que degradan tanto el ADN como el ARN, mientras que las ADNasas solo degradan el ADN. Esta es la diferencia clave entre Benzonase y DNase.
CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia clave
2. Qué es Benzonase
3. Qué es DNasa
4. Similitudes entre Benzonase y DNase
5. Comparación lado a lado - Benzonase vs DNasa en forma tabular
6. Resumen
¿Qué es Benzonase?
Benzonase es una endonucleasa modificada genéticamente de Serratia marcescens. Esta enzima se produce en huéspedes de E. coli a escala industrial. Benzonase es capaz de escindir ADN bicatenario, ADN lineal, ADN circular y ARN monocatenario. Por tanto, Benzonase es comercialmente importante. La enzima benzonasa es un dímero de proteína que tiene 245 aminoácidos idénticos, subunidades de ~ 30 kDa con dos enlaces disulfuro esenciales. Benzonase escinde los ácidos nucleicos en su extremo 5 'y da como resultado fragmentos con extremos 5' libres. Benzonase puede escindir ácidos nucleicos en cualquier secuencia, pero prefiere regiones ricas en GC.
Benzonase se almacena a -20 0 C. El pH óptimo para la actividad enzimática se encuentra que es 8,0 a 9,2. Las aplicaciones de Benzonase incluyen la preparación de muestras para electroforesis en gel de proteínas 2D donde Benzonase elimina los ácidos nucleicos unidos y la eliminación de contaminantes de ácidos nucleicos de las preparaciones de proteínas recombinantes. También se utiliza para reducir la viscosidad de los extractos de proteínas y evitar la acumulación de células en una mezcla celular.
¿Qué es DNasa?
La ADNasa es una enzima hidrolítica nucleasa que solo es capaz de escindir el ADN de doble hebra. Hay dos tipos principales de DNasas: DNasa I y DNasa II. La DNasa I participa en la escisión del ADN de doble hebra para producir polinucleótidos con extremos libres 5 '. La DNasa II participa en la escisión del ADN de doble hebra para producir hebras de polinucleótidos con extremos libres o salientes 3 '.
DNasa I
La DNasa I funciona a un pH óptimo entre 7,0 y 8,0. La actividad de la enzima depende de muchos cofactores iónicos que incluyen Ca 2+, Mg 2+ o Mn 2+. La actividad de Mg 2+ y Mn 2+ decide la función de la DNasa I. En presencia de Mg 2+, la DNasa I escinde cada hebra de dsDNA de forma independiente. Esto se realiza de forma aleatoria. Por el contrario, en presencia de Mn 2+, la enzima escinde ambas cadenas de ADN en aproximadamente el mismo sitio. Esta escisión dará como resultado la producción de dos tipos de fragmentos de ADN; un tipo con extremos romos y otro tipo con voladizos de uno o dos nucleótidos.
Figura 02: DNasa
DNasa II
La DNasa II funciona a un pH óptimo de 4,5-5,0 y se requieren iones metálicos divalentes para su actividad, similar a la DNasa I. Se sabe que el mecanismo de la DNasa II consta de tres pasos principales.
- Se inducen múltiples roturas de una sola hebra dentro de la estructura del ADN.
- Se producen nucleótidos y oligonucleótidos solubles en ácido.
- El cambio hipercrómico no lineal ocurre en la última fase.
Los principales inhibidores de la enzima DNasa incluyen quelantes de metales, metales de transición y productos químicos como el dodecilsulfato de sodio y el β-mercaptoetanol.
Las principales aplicaciones de la ADNasa incluyen la preparación de extractos de ARN sin ADN y extractos de proteínas, y la eliminación del ADN molde durante los experimentos de transcripción in vitro.
¿Cuáles son las similitudes entre Benzonase y DNase?
- Ambas son enzimas hidrolíticas.
- Ambas son nucleasas.
- Ambos participan escindiendo los enlaces fosfodiéster de los ácidos nucleicos.
- Ambos requieren un pH y temperaturas de almacenamiento óptimos para mantener la actividad de la enzima.
- Los inhibidores de enzimas incluyen agentes quelantes, metales de transición y detergentes químicos.
- Las aplicaciones se centran principalmente en la obtención de extractos de ADN, ARN y proteínas de alta pureza.
- Ambas enzimas se pueden producir mediante ingeniería genética.
¿Cuál es la diferencia entre benzonase y DNase?
Diferencia del medio del artículo antes de la mesa
Benzonase vs DNasa |
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| Benzonase es una enzima que es capaz de escindir ADN bicatenario, ADN lineal, ADN circular y ARN. | La ADNasa es una enzima que es capaz de escindir el ADN de doble hebra. |
| Sustrato para la enzima | |
| Tanto el ADN como el ARN son sustratos de la benzonasa. | El ADN es el sustrato de la ADNasa. |
| Estructura | |
| El rango de pH óptimo de Benzonase es 7.0 -8.0 | Los rangos óptimos de pH de DNasa I son 7.0 - 8.0 y DNase II es 4.5 - 5.0. |
Resumen - Benzonase vs DNase
Las enzimas nucleasas se utilizan ampliamente en diferentes procedimientos experimentales relacionados con la biología molecular y la ingeniería genética. Benzonase y DNase son dos tipos de nucleasas. La benzonasa participa en la degradación del ADN y el ARN, mientras que la ADNasa participa en la escisión del ADN de doble hebra. Esta es la diferencia básica entre benzonasa y DNasa … En la actualidad, ambos tipos de nucleasas se producen mediante tecnología de ADN recombinante que produce enzimas de mayor calidad que están optimizadas para una producción máxima.
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