Diferencia clave: tripsinización caliente frente a fría
La tripsinización en caliente y en frío son dos métodos utilizados en la disgregación enzimática de células en el cultivo de células animales. La diferencia clave entre la tripsinización caliente y fría, como sugieren los nombres, depende de la temperatura a la que se agrega la tripsina para la desagregación celular. La tripsinización en caliente tiene lugar en condiciones de temperatura más alta (36,5 - 37 0 C) mientras que la tripsinización en frío tiene lugar en condiciones de baja temperatura.
Durante el proceso de cultivo de células primarias de células animales, se utilizan tres métodos principales que han demostrado su eficacia. Los tres métodos incluyen la disgregación mecánica de células, la disgregación enzimática de células y la técnica de explante primario. La desagregación enzimática de las células conduce al aislamiento de las células y se realiza mediante la enzima que degrada las proteínas tripsina. Por lo tanto, este proceso se conoce como tripsinización. La tripsinización se puede realizar en dos condiciones diferentes, a saber, tripsinización en caliente y tripsinización en frío. La tripsinización en caliente es el método de tratar las células con tripsina en condiciones cálidas a una temperatura de 36,5 - 37 0C. La tripsinización en frío es el proceso de tratamiento con tripsina que tiene lugar en condiciones más frías, preferiblemente en hielo manteniendo temperaturas muy bajas.
CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia clave
2. Qué es la tripsinización caliente
3. Qué es la tripsinización fría
4. Similitudes entre la tripsinización caliente y fría
5. Comparación lado a lado: tripsinización caliente frente a fría en forma tabular
6. Resumen
¿Qué es la tripsinización caliente?
La tripsinización se puede realizar para desagregar los componentes celulares con el fin de aislar las células para producir un cultivo celular primario. La tripsina es una enzima de degradación de proteínas, y la mezcla de enzimas utilizada en la tripsinización puede ser un extracto crudo o un producto purificado. Se dice que el extracto crudo es más eficaz en la lisis de proteínas y la desintegración celular, ya que contiene otras enzimas degradantes.
La tripsinización en caliente es el método enzimático más comúnmente utilizado para la disgregación celular que tiene lugar en condiciones de temperatura más alta. Antes del tratamiento por tripsinización, el tejido deseado se corta en trozos más pequeños. Facilita el proceso de desagregación fácil. El tejido cortado se lava luego en un medio especial conocido como medio de disección sal basal.
Una vez completada la etapa de lavado, las células se transforman en un matraz que contiene la enzima activa, que es la tripsina. Como esta técnica implica un protocolo de tripsinización en caliente, la tripsina se coloca a una temperatura de alrededor de 37 0 C durante unas cuatro horas.
Figura 01: Tripsina
Los contenidos se mezclan y agitan utilizando métodos de centrifugación para facilitar el protocolo y acelerar el proceso de desagregación. Una vez que se alcanza el tiempo recomendado, las células pueden derivarse del sobrenadante. Las células derivadas del sobrenadante se incuban luego a una temperatura y un tiempo particulares.
¿Qué es la tripsinización en frío?
La tripsinización en frío es el otro tipo de tripsinización que tiene lugar en condiciones de frío. En esta técnica, las células que se cortan y lavan se colocan en viales sobre hielo y luego se empapan con tripsina. El período de remojo es mucho más largo, alrededor de 6 a 24 horas.
Después de la terminación del procedimiento de remojo, la tripsina se elimina a partir del lisado celular, y las piezas de tejido se incubó adicionalmente a 37 0 C durante aproximadamente 20 - 30 minutos. La disgregación de las células se produce mediante el pipeteo repetido de la mezcla de tejido. Esto permitirá que las células se disocien de la membrana y lleguen al sobrenadante. Una vez que las células están en el sobrenadante, se incuban y crecen a la temperatura y el período de tiempo deseados.
El método de tripsinización en frío tiene varias ventajas.
- Mayor rendimiento de células viables a medida que se minimiza el daño celular. El daño celular se minimiza al no usar pasos de centrifugación.
- Método muy conveniente.
- Menos laborioso.
La principal limitación del método de tripsinización en frío es que no se pueden utilizar grandes cantidades en una sola instancia.
¿Cuáles son las similitudes entre la tripsinización caliente y fría?
- Los procesos de tripsinización en frío y en caliente utilizan la enzima tripsina para la disgregación de las células.
- Los procesos de tripsinización en frío y en caliente se utilizan en procedimientos de cultivo celular para la disgregación de células.
- En los procedimientos de tratamiento de tripsinización en frío y en caliente, las células se derivan del sobrenadante.
¿Cuál es la diferencia entre tripsinización caliente y fría?
Diferencia del medio del artículo antes de la mesa
Trypsinización caliente vs fría |
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| La tripsinización en caliente es el método para tratar las células con tripsina en condiciones cálidas a una temperatura de 36,5 - 37 0. | La tripsinización en frío es el proceso de tratamiento con tripsina que tiene lugar en condiciones más frías, preferiblemente en hielo manteniendo temperaturas muy bajas. |
| Protocolo | |
| Los trozos de tejido cortados se mantienen a 37 0 C continuamente durante todo el procedimiento. | Los trozos de tejido cortados se mantienen inicialmente a temperaturas enfriado con hielo y después se mantuvo a 37 0. |
| Temperatura | |
| La tripsinización caliente ocurre a 36,5 - 37 0 | La tripsinización fría se produce a temperaturas heladas. |
| Tiempo consumido | |
| Se requiere menos tiempo para todo el proceso (alrededor de 4 horas) de tripsinización en caliente. | Se requiere más tiempo (alrededor de 6 a 24 horas) para la tripsinización en frío. |
| Rendimiento de células viables | |
| Baja en tripsinización caliente. | Alto contenido de tripsinización en frío. |
| Uso de centrifugación | |
| Se requiere centrifugación para la disgregación de células en tripsinización caliente. | No se requiere centrifugación en la tripsinización en frío. |
| Cantidad de tejido inicial para tripsinización | |
| Se puede utilizar una mayor cantidad de tejido en la tripsinización en caliente. | Se puede utilizar una cantidad menor de tejido en la tripsinización en frío. |
| Daño celular | |
| Alto debido a la centrifugación en tripsinización caliente. | Menos debido a la tripsinización en frío. |
Resumen: tripsinización caliente vs fría
La tripsinización es el método de utilizar la enzima que degrada las proteínas tripsina para la disgregación y preparación de cultivos celulares primarios durante el proceso de cultivo celular. Hay dos técnicas principales de tripsinización basadas en las temperaturas utilizadas durante el procedimiento. Son tripsinización caliente y fría. Tripsinización caliente se lleva a cabo a 37 0 C mientras que tripsinización frío se lleva a cabo bajo condiciones de hielo frío. Aunque la tripsinización en frío tarda más en completarse, se dice que tiene un mayor rendimiento de células viables. Esto se debe al hecho de que el daño celular se minimiza en la tripsinización en frío, ya que no utiliza pasos de centrifugación vigorosos. Ésta es la diferencia entre la tripsinización fría y caliente.
