Diferencia clave - RAPD vs RFLP
Los marcadores genéticos se utilizan en biología molecular para identificar variaciones genéticas entre individuos y especies. El ADN polimórfico amplificado aleatorio (RAPD) y el polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) son dos marcadores moleculares importantes que se utilizan de forma rutinaria en los laboratorios. La RAPD se realiza con cebadores oligonucleotídicos cortos y arbitrarios, y se basa en la amplificación aleatoria de las múltiples ubicaciones a lo largo del ADN molde del organismo. La RFLP se realiza con una endonucleasa de restricción específica y se basa en el polimorfismo de los fragmentos de restricción y la hibridación resultantes. La diferencia clave entre RAPL y RFLP es que RAPD es un tipo de técnica de PCR que se realiza sin el conocimiento previo de la secuencia, mientras que RFLP no está involucrado en la PCR y requiere un conocimiento previo de la secuencia para llevar a cabo la técnica.
CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia clave
2. Qué es RAPD
3. Qué es RFLP
4. Comparación lado a lado - RAPD vs RFLP
5. Resumen
¿Qué es RAPD?
RAPD es un marcador molecular útil en biología molecular. Es una técnica rápida y sencilla. RAPD puede definirse como un método que da como resultado secuencias de ADN polimórficas como resultado de la amplificación aleatoria de múltiples ubicaciones de la plantilla de ADN diana. RAPD utiliza cebadores oligonucleotídicos cortos con secuencias arbitrarias para la amplificación por PCR. Los cebadores se sintetizan artificialmente sin el conocimiento previo de la secuencia. Por tanto, se considera una técnica sencilla y útil.
Los siguientes pasos principales están involucrados en RAPD.
- Extracción de ADN diana
- Amplificación de las múltiples ubicaciones del ADN diana utilizando cebadores elegidos al azar
- Electroforesis en gel de los productos de PCR amplificados
- Tinción con bromuro de etidio e identificación del polimorfismo
Como resultado de la variación en el apareamiento del cebador, durante la amplificación se generan diferentes fragmentos con diferentes longitudes. Por lo tanto, los patrones de bandas en los geles son diferentes entre individuos y especies. Por tanto, RAPD permite la detección de variación genética entre organismos en identificación y diferenciación.
RAPD se aplica en diversos estudios de biología molecular como la identificación de la diferencia genética entre especies estrechamente relacionadas, mapeo de genes, huellas de ADN, identificación de enfermedades hereditarias, etc.
Figura 01: RAPD
¿Qué es RFLP?
Los polimorfismos de longitud de los fragmentos de restricción (RFLP) es un marcador molecular utilizado en biología molecular para la identificación de variaciones genéticas en secuencias de ADN homólogas. Es el primer marcador genético desarrollado para la toma de huellas de ADN. Todos los organismos producen perfiles de ADN únicos cuando se restringen con enzimas de restricción específicas. RFLP sirve como una herramienta importante en la producción de perfiles de ADN únicos de individuos y la detección de variación genética entre ellos. Cuando las muestras de ADN se digieren con endonucleasas de restricción específicas, se obtienen diferentes perfiles de ADN que son únicos para cada individuo. Por lo tanto, el principal de este método es la detección de variación genética entre organismos mediante la restricción del ADN homólogo con enzimas de restricción específicas y el análisis del polimorfismo de la longitud del fragmento mediante electroforesis en gel y transferencia. Los patrones de transferencia son únicos para cada organismo y caracterizan los genotipos específicos.
Los siguientes pasos están relacionados con RFLP.
- Aislamiento de una cantidad suficiente de ADN de muestras.
- Fragmentación de las muestras de ADN con endonucleasas de restricción específicas en una secuencia corta
- Separación de los fragmentos resultantes con diferentes longitudes mediante electroforesis en gel de agarosa.
- Transferencia del perfil de gel a una membrana mediante transferencia Southern
- Hibridación de la membrana con sondas marcadas y análisis del polimorfismo de la longitud del fragmento en cada perfil
RFLP tiene diversas aplicaciones como el diagnóstico de enfermedades hereditarias, mapeo del genoma, identificación criminal en estudios forenses, pruebas de paternidad, etc.
Figura 02: Genotipado RFLP
¿Cuál es la diferencia entre RAPD y RFLP?
Diferencia del medio del artículo antes de la mesa
RAPD frente a RFLP |
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| RAPD es un marcador molecular basado en cebadores aleatorios y PCR. | RFLP es un marcador molecular basado en la producción de fragmentos de restricción de diferentes longitudes. |
| Muestra requerida | |
| Las pequeñas muestras de ADN son suficientes para el análisis RAPD. | Se requiere una gran cantidad de muestra de ADN extraída para el análisis RFLP. |
| Hora | |
| RAPD es un proceso rápido. | RFLP es un proceso que requiere mucho tiempo. |
| Uso de imprimación | |
| Se usan cebadores aleatorios y se pueden usar los mismos cebadores para diferentes especies. | Las sondas específicas de especies se utilizan en RFLP para la hibridación. |
| Fiabilidad | |
| La confiabilidad de la técnica es menor en comparación con RFLP. | RFLP es una técnica confiable. |
| Secando | |
| RAPD implica transferencia del sur. | La transferencia Southern es un paso de RFLP. |
| Detección de variación alélica | |
| RAPD no puede detectar variaciones alélicas. | RFLP puede detectar variaciones alélicas. |
| Necesidad de conocimiento de la secuencia | |
| RAPD no requiere conocimientos previos de secuencia. | Se requieren conocimientos previos de secuencia para el diseño de sondas. |
| PCR | |
| La PCR está involucrada con RAPD | La PCR no está involucrada con RFLP. |
| Reproducibilidad | |
| RAPD tiene baja reproducibilidad | RFLP tiene una alta reproducibilidad en comparación con RAPD. |
Resumen - RAPD vs RFLP
RAPD y RFLP son marcadores importantes utilizados en biología molecular. Ambos métodos son capaces de detectar variaciones genéticas entre organismos. RAPD se realiza utilizando cebadores aleatorios. La RFLP se realiza utilizando enzimas de restricción específicas. Ambos métodos producen perfiles de ADN únicos para organismos individuales. RAPD está involucrado comparativamente pocos pasos que RFLP. Pero produce resultados menos fiables y reproducibles que RFLP. Esta es la principal diferencia entre RAPD y RFLP.
