Diferencia clave: ELISA directo e indirecto
Un inmunoensayo ligado a enzimas (ELISA), también conocido como inmunoensayo enzimático, es una prueba serológica que detecta anticuerpos en la sangre. Se utiliza como herramienta de diagnóstico para averiguar si el paciente ha estado expuesto a un tipo particular de virus u otro agente infeccioso (antígeno) y si el organismo ha producido anticuerpos contra la infección. ELISA también puede identificar las infecciones pasadas y actuales. Por lo tanto, los médicos a menudo utilizan ELISA como prueba de detección previa antes de un análisis en profundidad de las enfermedades. Esta prueba se puede realizar en el laboratorio tomando una muestra de sangre del paciente. Hay dos tipos de prueba ELISA: ELISA directo y ELISA indirecto. La diferencia clave entre el ELISA directo e indirecto es que el ELISA indirecto es más sensible y requiere la adición de un anticuerpo secundario, mientras que el ELISA directo es menos sensible y solo usa un anticuerpo primario.
CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia clave
2. Qué es ELISA directo
3. Qué es ELISA indirecto
4. Comparación lado a lado - ELISA directo vs indirecto
5. Resumen
¿Qué es el ELISA directo?
ELISA es una prueba de diagnóstico de enfermedades que se realiza para identificar la presencia de antígenos o anticuerpos particulares en la sangre. Se realiza como ensayo en placa. Utiliza anticuerpos ligados a enzimas de fácil análisis. La presencia de antígenos en la muestra de suero se une a anticuerpos específicos ligados a enzimas. En el paso final, se agrega un sustrato específico para reaccionar con la enzima. La enzima convierte el sustrato en un producto coloreado o que produce señales. El cambio de color en el sustrato químico revela la presencia de un anticuerpo particular en la muestra de suero. La prueba ELISA directa utiliza solo un anticuerpo primario ligado a la enzima. Al unirse al antígeno, cambia rápidamente de color, lo que indica la presencia del agente infeccioso en la sangre. Sin embargo,la intensidad de las señales es más débil en ELISA directo ya que los epítopos se limitan a la unión de los antígenos. Por tanto, el ELISA directo es menos sensible en comparación con el ELISA indirecto.
Figura 01: Prueba ELISA directa
¿Qué es ELISA indirecto?
El ELISA se puede realizar usando dos tipos de anticuerpos, a saber; anticuerpo primario y anticuerpo secundario. La herramienta ELISA indirecta utiliza ambos tipos de anticuerpos para amplificar las señales para una mejor detección. La técnica de ELISA indirecta se realiza de la siguiente manera.
- Las placas se incuban con antígenos y se lavan para bloquear la unión inespecífica.
- Luego se agregan y lavan los anticuerpos primarios.
- Se añaden y lavan los anticuerpos secundarios ligados a enzimas.
- Se agrega un sustrato y se deja reaccionar con las enzimas.
- Se detectan señales y se identifica la presencia o ausencia del antígeno específico en la muestra.
En la prueba ELISA indirecta, varios anticuerpos secundarios pueden unirse a un único anticuerpo primario. Los anticuerpos secundarios se enlazan con enzimas de fácil análisis. Por lo tanto, una unión puede generar una señal fuerte debido a más de una interacción. Por tanto, el ELISA indirecto es más sensible que el ELISA directo. Sin embargo, el ELISA indirecto puede generar señales inespecíficas debido a reacciones cruzadas de los anticuerpos secundarios.
Figura 02: Prueba ELISA indirecta
¿Cuál es la diferencia entre ELISA directo e indirecto?
Diferencia del medio del artículo antes de la mesa
ELISA directo vs indirecto |
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| El ELISA directo es menos sensible en comparación con el ELISA indirecto. | ELISA indirecto es más sensible. |
| Tiempo tomado | |
| La prueba ELISA directa es un proceso rápido. | El ELISA indirecto requiere mucho tiempo. |
| Uso de anticuerpos | |
| Solo se utiliza un tipo de anticuerpos (anticuerpos primarios) en ELISA directo. | Los anticuerpos primarios y secundarios se utilizan para ELISA indirecto. |
| Enlace con enzimas | |
| Los anticuerpos primarios están relacionados con enzimas. | Los anticuerpos secundarios están ligados a enzimas. |
| Reactividad cruzada de segundos anticuerpos | |
| El ELISA directo elimina la reactividad cruzada de segundos anticuerpos. | El ELISA indirecto se ve afectado por la reactividad cruzada de los segundos anticuerpos. |
| Señales | |
| Las señales son débiles en comparación con ELISA indirecto. | Las señales se amplifican en ELISA indirecto. Por tanto, es fácil de detectar. |
Resumen: ELISA directo vs indirecto
ELISA es una técnica bioquímica utilizada principalmente en inmunología para detectar la presencia de un anticuerpo o un antígeno en una muestra de sangre de un paciente. Se puede realizar mediante dos procesos conocidos como ELISA directo o indirecto. La prueba ELISA directa usa solo anticuerpos primarios para detectar el antígeno, mientras que ELISA indirecto usa anticuerpos primarios y secundarios. En el ELISA directo, los anticuerpos primarios se marcan, mientras que en el ELISA indirecto se marcan los anticuerpos secundarios. Ésta es la diferencia entre ELISA directo e indirecto.
