Diferencia clave - T4 vs T7 DNA Ligase
La ADN ligasa es una enzima importante utilizada en técnicas de biología molecular. Funciona como un pegamento molecular para unir nucleótidos formando enlaces fosfodiéster entre nucleótidos. Los enlaces fosfodiéster se forman entre el extremo hidroxilo 3 'del resto de azúcar y el grupo fosfato del extremo 5'. La ADN ligasa es vital en el proceso de replicación para unir los fragmentos de Okazaki de la hebra rezagada y durante los mecanismos de reparación del ADN y los experimentos de clonación in vitro para unir el gen de interés deseado al genoma del vector. Hay dos ADN ligasas principales utilizadas actualmente por los biólogos moleculares: ADN ligasas T4 y T7. La ADN ligasa de T4 es una de las primeras enzimas que se aisló del bacteriófago T4. La ADN ligasa T7, que es una proteína más pequeña, es una enzima aislada del bacteriófago T7. Esta es la diferencia clave entre las ligasas de ADN T4 y T7.
CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia clave
2. Cuál es la acción de la ADN ligasa
3. Qué es la ADN ligasa T4
4. Qué es la ADN ligasa T7
4. Similitudes entre la ADN ligasa T4 y T7
5. Comparación lado a lado: ADN ligasa T4 y T7 en forma tabular
6. Resumen
¿Cuál es la acción de la ADN ligasa?
La ligadura del ADN se produce en una reacción de tres pasos. El primer paso es un ataque nucleofílico en el alfa-fósforo del ATP que genera un intermedio enzima-adenilato covalente en el que el AMP está unido al nitrógeno de la cadena lateral terminal de la lisina. En el segundo paso, se produce un ataque nucleófilo sobre el fósforo de la enzima adenilato por el sustrato de ADN terminado en 5'-fosfato, liberando lisina y formando ADN-adenilato. En el paso final, el ADN-adenilato es atacado por 3'-OH de otra hebra de ADN, liberando AMP y uniéndose a los polinucleótidos.
¿Qué es la ADN ligasa T4?
T4 Ligase fue la primera ligasa aislada e identificada por Meselson, Weigle y Kellenberger y fue la primera ligasa comercial producida. La ADN ligasa T4 es una enzima dependiente de ATP que cataliza la formación de enlaces fosfodiéster. Es una cadena polipeptídica única con 487 residuos de aminoácidos y tiene un peso molecular de aproximadamente 77 kDa. El pH óptimo para su actividad se encuentra en el rango de 7.5 - 8.
Figura 01: ADN ligasa T4
La ADN ligasa T4, como su nombre indica, está presente en el bacteriófago T4 y se aisló cuando el fago produjo la enzima tras la infección con E. coli. La enzima liga dúplex de ADN bicatenario con extremos romos y los fragmentos que se unirán deben estar muy próximos entre sí.
¿Qué es la ADN ligasa T7?
La ligasa T7 es una proteína de 41 kDa producida por el bacteriófago T7 y se aísla infectando células de E. coli. La función principal de la ligasa T7 es ligar dúplex de ADN a través de enlaces fosfodiéster y unir fragmentos cercanos de ADN durante los experimentos de clonación. El pH óptimo para la ADN ligasa T7 se encuentra en el rango de 7,0 a 7,2. La ligasa T7 depende de ATP. Las ADN ligasas T7 también son capaces de hibridar híbridos de ADN y ARN, dando lugar a conformaciones anormales durante la transcripción; sin embargo, este fenómeno aún está siendo investigado mediante estudios in vitro.
¿Cuáles son las similitudes entre la ADN ligasa T4 y T7?
- La ADN ligasa T4 y T7 participan en una reacción de ligación mediante el apareamiento de los dúplex de ADN mediante la formación de enlaces fosfodiéster entre el extremo 3 'OH y el extremo 5' fosfato del fragmento de ADN.
- Ambas enzimas ligan dúplex de ADN de extremos romos que están muy próximos entre sí.
- Ambas enzimas dependen de ATP.
- Estas enzimas se aíslan infectando células de E. coli con el bacteriófago particular.
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Las aplicaciones de ambas enzimas incluyen:
- Clonación molecular: para ligar el gen de interés al vector.
- Reparación de ADN: para reparar nichos de doble cadena.
- Replicación de ADN in vitro
- Reacción en cadena de la ligasa
¿Cuál es la diferencia entre la ADN ligasa T4 y T7?
Diferencia del medio del artículo antes de la mesa
T4 vs T7 ADN ligasa |
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| T4 ADN ligasa tipo de ADN ligasa aislada del bacteriófago T4 y que participa en la ligadura de fragmentos de ADN adyacentes mediante la formación de enlaces fosfodiéster. | T7 DNA Ligase tipo de DNA ligasa aislada del bacteriófago T7 y que participa en la ligadura de fragmentos de DNA adyacentes mediante la formación de enlaces fosfodiéster. |
| Tamaño de la proteína | |
| El tamaño de la ADN ligasa T4 es 77 kDa, mayor en comparación con la ADN ligasa T7. | El tamaño de la ADN ligasa de T7 es de 41 kDa. |
| PH óptimo | |
| El rango de pH que funciona con la ADN ligasa T4 es de 7.5 - 8.0. | El rango de pH que funciona con la ADN ligasa T7 es de 7.0 - 7.2. |
Resumen - ADN ligasa T4 vs T7
Las ADN ligasas son una clase importante de enzimas involucradas en la clonación molecular para producir moléculas de ADN recombinante que contienen el gen de interés. La reacción de ligadura es una reacción que utiliza energía y se están realizando nuevos estudios de investigación para mejorar la precisión mediante la modulación de las ligasas disponibles. Las ADN ligasas T4 y T7 son dos tipos de importantes enzimas ADN ligasa utilizadas en técnicas de biología molecular. La ADN ligasa T7 también es el resultado de una investigación que se basó en la ligasa primaria aislada de E. coli infectada con T4. T7 se retrata con mayor eficiencia y precisión en el desempeño de su función debido a su menor tamaño. Esta es la diferencia entre la ligasa T4 y T7.
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