Diferencia clave: clonación frente a subclonación
La clonación y la subclonación son procedimientos de biología molecular que crean células u organismos genéticamente idénticos que portan el ADN o el gen de interés. La clonación es una técnica que implica la inserción del gen o ADN interesado en un vector, su replicación dentro de una bacteria huésped y la producción de células u organismos que son copias exactas de la estructura genética. La subclonación es una técnica que implica la inserción del gen de interés, que ya está insertado en un vector, en un vector secundario, la replicación del mismo dentro de una bacteria huésped y la producción de copias genéticamente idénticas de células u organismos. La diferencia clave entre clonación y subclonación es que, en la clonación, el gen de interés, una vez ligado a un vector, continúa el proceso de clonación mientras que, en la subclonación,el gen de interés ya clonado se separa del vector original y se inserta de nuevo en un vector receptor y se continúa con el proceso.
CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia clave
2. Qué es la clonación
3. Qué es la subclonación
4. Comparación lado a lado - Clonación frente a subclonación
5. Resumen
¿Qué es la clonación?
La clonación es el procedimiento que produce organismos o células genéticamente idénticos. En la naturaleza, la clonación ocurre en los medios de reproducción asexual. Cuando no hay recombinación o alteración genética, las células hijas reciben la misma composición genética que la madre. Los organismos procariotas y eucariotas crean clones por fisión binaria, gemación, mitosis, etc. En biología molecular, la clonación de genes o fragmentos específicos de ADN es un método popular para estudiar la estructura y función de esa sección de ADN en particular.
El principal objetivo de la clonación molecular es realizar millones de copias de células u organismos genéticamente idénticos que porten el fragmento de ADN de interés (principalmente genes). Crea organismos con copias genéticas exactas de otro. Principalmente, los genes específicos se clonan en estudios moleculares para obtener información estructural y funcional y para la secuenciación del ADN. Además, para la producción de proteínas o productos específicos a gran escala, la clonación se usa ampliamente.
Procedimiento de clonación
Los pasos básicos del procedimiento de clonación son los siguientes.
- Identificación y aislamiento del gen de interés. (Amplificación del gen de interés por PCR).
- Digestión de restricción del gen de interés (la endonucleasa de restricción corta el gen).
- Digestión por restricción del ADN del vector. (El ADN del vector también se corta usando la misma endonucleasa de restricción).
- Inserción del gen en el vector y formación de la molécula recombinante.
- Transformación del vector recombinante en una bacteria huésped.
- Aislamiento e identificación de las bacterias transformadas (el vector plásmido debe contener un gen seleccionable, más comúnmente un gen de resistencia a antibióticos para seleccionar bacterias transformadas).
- Expresión de genes recombinantes dentro del hospedador.
Figura_01: Procedimiento de clonación
¿Qué es la subclonación?
La subclonación es un procedimiento de mover un gen de interés de un vector a otro para ver la expresión del gen y obtener la funcionalidad deseada del gen. En este método, están involucrados dos vectores; a saber, vector padre y vector de destino. Los insertos clonados se mueven nuevamente a un segundo vector en la subclonación. El objetivo de transferir el gen del primer vector al segundo vector es obtener algo que el primer vector no podría hacer o separar un gen nuevamente dentro del fragmento de ADN ya clonado y expresarlo solo. En este procedimiento se utilizan enzimas de restricción al principio.
Procedimiento de subclonación
Los pasos básicos de la subclonación son los siguientes.
- Con la ayuda de endonucleasas de restricción, separación del ADN de interés en el plásmido donante (vector parental).
- Amplificación del ADN de interés mediante PCR.
- Purificación del producto de PCR (ADN de interés) mediante electroforesis en gel.
- Apertura del plásmido receptor mediante las mismas endonucleasas de restricción utilizadas para separar el ADN de interés en el plásmido original.
- Ligadura del ADN de interés (gen) en el plásmido receptor para crear el plásmido subclonado.
- Transformación del vector subclonado en una bacteria huésped competente.
- Cribado de células transformadas.
- Purificación del ADN plasmídico y uso para secuenciación del ADN o expresión de genes para obtener los productos deseados.
La subclonación se lleva a cabo en ocasiones para aislar un gen del grupo de genes clonados o cuando se requiere que el gen de interés se transfiera a un plásmido útil para ver la función exacta del gen de interés.
Figure_02: Procedimiento de subclonación
¿Cuál es la diferencia entre clonación y subclonación?
Diferencia del medio del artículo antes de la mesa
Clonación vs subclonación |
|
| La clonación es el procedimiento que produce organismos o células genéticamente idénticos. | La subclonación es un procedimiento de mover un gen de interés de un vector a otro para ver la expresión del gen y obtener la funcionalidad deseada del gen. |
| Proceso | |
| Separar el ADN de interés del organismo e insertarlo en un vector una vez y clonarlo | El ADN ya clonado se separa del primer vector, se inserta en un segundo vector y se clona. |
| Insertar movimiento mediante vectores | |
| No mueve insertos (ADN de interés) de un vector a otro. | Mueva las inserciones del vector principal al vector de destino. |
Resumen: clonación vs subclonación
La clonación crea células u organismos genéticamente idénticos con el gen o ADN insertado de interés. Procede a través de la separación e inserción del ADN de interés en un vector y la expresión dentro de una bacteria huésped. La subclonación comparte pasos similares con la clonación. Sin embargo, en la subclonación, el fragmento de ADN ya clonado (gen de interés) se inserta en un vector y se transforma en una bacteria huésped. Esa es la diferencia clave entre la clonación y la subclonación.
