Diferencia Entre Transferencia Northern Southern Y Western

2024 Autor: Mildred Bawerman | [email protected]. Última modificación: 2023-12-16 08:38

Diferencia clave: transferencia del norte, del sur y del oeste

La detección de secuencias específicas de ADN, ARN y proteínas es esencial para varios tipos de estudios en biología molecular. La electroforesis en gel es una técnica que separa el ADN, el ARN y las proteínas según su tamaño. A partir de los perfiles de gel, se detecta una secuencia de ADN, secuencia de ARN o proteína en particular mediante técnicas especiales llamadas transferencia e hibridación con sondas marcadas. Hay tres tipos diferentes de métodos de transferencia, a saber, sur, norte y oeste. La diferencia clave entre la transferencia Northern Southern y Western radica en el tipo de molécula que detecta en una muestra. La transferencia Southern es un método que detecta una secuencia de ADN específica de una muestra de ADN. La transferencia Northern es una técnica que detecta una secuencia de ARN específica de una muestra de ARN. La transferencia Western es un método que detecta una proteína específica de una muestra de proteína.

CONTENIDO

1. Descripción general y diferencia clave

2. Qué es Southern Blot

3. Qué es Northern Blot

4. Qué es Western Blot

5. Comparación lado a lado - Northern vs Southern vs Western Blot

6. Resumen

¿Qué es el Southern Blotting?

La técnica de transferencia Southern fue desarrollada por EM Southern en 1975 para la identificación de una secuencia de ADN específica a partir de una muestra de ADN. Esta es la primera técnica de transferencia introducida en biología molecular. Permitió la detección de genes específicos del ADN, fragmentos específicos del ADN, etc. Hay varios pasos involucrados en la técnica de transferencia del sur. Son los siguientes.

1. El ADN se aísla de la muestra y se digiere con endonucleasas de restricción.
2. La muestra digerida se separa mediante electroforesis en gel de agarosa.
3. Los fragmentos de ADN en el gel se desnaturalizan en hebras simples mediante el uso de una solución alcalina.
4. El ADN monocatenario se transfiere a una membrana de filtro de nitrocelulosa mediante transferencia capilar.
5. El ADN transferido se fija a la membrana de forma permanente.
6. El ADN fijado en la membrana se hibrida con sondas marcadas.
7. El ADN no unido se elimina de la membrana mediante lavado.
8. Se expone una película de rayos X a la membrana y se prepara una autorradiografía.

La transferencia de Southern se aplica a diferentes aspectos de la biología molecular. Es útil en mapeo RFLP, estudios forenses, metilación de ADN en expresión génica, detección de genes mutados en trastornos genéticos, huellas de ADN, etc.

Figura 01: Técnica de Southern Blot

¿Qué es Northern Blotting?

La transferencia Northern es un método diseñado para detectar una secuencia de ARN específica o una secuencia de ARNm de una muestra para estudiar la expresión génica. Esta técnica fue desarrollada por Alwine, Kemp y Stark en 1979. Se diferencia de las técnicas de transferencia sourthern y western debido a varios pasos. Sin embargo, esta técnica también se realiza mediante electroforesis en gel, transferencia e hibridación con sondas marcadas específicas y detección. La técnica de transferencia Northern se realiza como sigue.

1. El ARN se extrae de la muestra y se separa mediante electroforesis en gel.
2. El ARN se transfiere del gel a una membrana de transferencia y se fija.
3. La membrana se trata con una sonda marcada preparada a partir de cDNA o RNA (la sonda es complementaria a una secuencia específica en la muestra).
4. La sonda se incuba con la membrana para unirse con una secuencia específica.
5. Las sondas no unidas se lavan.
6. Los fragmentos hibridados se detectan mediante una autorradiografía.

La transferencia Northern es una herramienta importante en la detección y cuantificación de ARNm hibridado, estudiando la degradación del ARN, evaluación de la vida media del ARN, detección de empalme de ARN, estudio de la expresión génica, etc.

Figura 02: Transferencia del norte

¿Qué es el Western Blot?

La transferencia Western es un método para detectar una proteína específica a partir de una mezcla de proteínas mediante el uso de un anticuerpo marcado. Por lo tanto, la transferencia de Western también se conoce como inmunotransferencia. Esta técnica fue introducida por Towbin et al en 1979 y ahora se realiza de forma rutinaria en los laboratorios para el análisis de proteínas. Los pasos son los siguientes.

1. Las proteínas se extraen de la muestra.
2. Las proteínas se separan por sus tamaños mediante electroforesis en gel de poliacrilamida
3. Las moléculas separadas se transfieren a una membrana de PVDF o una membrana de nitrocelulosa mediante electroporación.
4. La membrana está bloqueada por una unión inespecífica con los anticuerpos.
5. Las proteínas transferidas se unen al anticuerpo primario (anticuerpos marcados con enzimas).
6. La membrana se lava para eliminar los anticuerpos primarios unidos de forma inespecífica.
7. Los anticuerpos unidos se detectan añadiendo un sustrato y detectando el precipitado coloreado formado.

La transferencia Western es útil en la detección de anticuerpos anti-VIH en una muestra de suero humano. El Western blot también se puede utilizar como prueba de confirmación de la infección por hepatitis B y prueba definitiva de la enfermedad de las vacas locas.

Figura 03: Western Blot

¿Cuál es la diferencia entre Northern Southern y Western Blot?

Diferencia del medio del artículo antes de la mesa

Transferencia del norte vs del sur vs occidental
Tipo de molécula detectada
Transferencia del norte	La transferencia Northern detecta una secuencia de ARN específica de una muestra de ARN.
Southern Blotting	La transferencia Southern detecta una secuencia de ADN específica de una muestra de ADN.
Western Blot	La transferencia Western detecta una proteína específica de una muestra de proteína.
Tipo de Gel
Transferencia del norte	Esto usa gel de agarosa / formaldehído.
Southern Blotting	Esto usa un gel de agarosa.
Western Blot	Esto usa gel de poliacrilamida.
Método de secado
Transferencia del norte	Esta es una transferencia capilar.
Southern Blotting	Esta es una transferencia capilar.
Western Blot	Esta es una transferencia eléctrica.
Sondas utilizadas
Transferencia del norte	Sondas de ADNc o ARN marcadas radiactivamente o no radiactivamente.
Southern Blotting	Las sondas de ADN se marcan radiactivamente o no radiactivamente.
Western Blot	Los anticuerpos primarios se utilizan como sondas.
Sistema de detección
Transferencia del norte	Esto se hace mediante una autorradiografía o detección de cambio de luz o color.
Southern Blotting	Esto se hace mediante una autorradiografía, detección de luz o cambio de color.
Western Blot	Esto se hace mediante la detección de luz o cambio de color.

Resumen - Transferencia del norte vs del sur vs occidental

El blotting es una técnica especial desarrollada para la identificación de ADN, ARN o proteína específicos de las muestras. Hay tres procedimientos de transferencia separados, a saber, norte, sur y oeste, para detectar un tipo específico de molécula. La técnica de transferencia Northern está diseñada para detectar una secuencia de ARN específica a partir de una mezcla de ARN. La técnica de transferencia de Southern permite la detección de una secuencia de ADN específica a partir de una muestra de ADN y la técnica de transferencia de Western se desarrolla para identificar una proteína específica de una mezcla de proteínas.