Diferencia clave: página SDS frente a página nativa
SDS y la página nativa son dos tipos de técnicas de electroforesis en gel de poliacrilamida utilizadas en Biología Molecular. La diferencia clave entre SDS Page y Native Page es el tipo de gel de poliacrilamida utilizado. En SDS Page se utiliza un gel desnaturalizante, por lo que las moléculas se separan en función de su peso molecular. Por el contrario, en Native Page, se utilizan geles no desnaturalizantes. Por lo tanto, las moléculas se separan en función de su tamaño, carga y forma.
La electroforesis en gel de poliacrilamida (Page) utiliza un gel elaborado mediante la polimerización de monómeros de acrilamida con metilen bisacrilamida. La poliacrilamida es más resistente y estable al calor que la agarosa. Los geles de poliacrilamida tienen un tamaño de poro más pequeño que permite la separación eficiente de proteínas. Hay dos tipos principales de configuraciones de página, a saber, página SDS y página nativa. La electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS Page o sulfato de sodio-dodecilo separa las proteínas según su peso molecular. Los geles desnaturalizantes se utilizan en la página SDS. Native Page utiliza geles no desnaturalizantes y separa las proteínas según su tamaño, carga y forma (conformación 3D).
CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia clave
2. Qué es la página SDS
3. Qué es la página nativa
4. Similitudes entre la página SDS y la página nativa
5. Comparación lado a lado: página SDS frente a la página nativa en forma tabular
6. Resumen
¿Qué es la página SDS?
SDS Page es la técnica electroforética más común utilizada para separar proteínas en función de su peso molecular. El gel se elabora agregando SDS (dodecilsulfato de sodio), que es un detergente. SDS convierte las proteínas en monómeros. SDS es un detergente aniónico. Por lo tanto, agrega una carga negativa neta a las proteínas dentro de un amplio rango de pH. Cuando la carga neta negativa se imparte a las moléculas de proteína, debido a la variación de carga, las estructuras complejas se descomponen. Debido a la carga negativa, las proteínas se atraen hacia el extremo positivo. Así, las moléculas con menor peso molecular viajan más rápido en la matriz del gel y se pueden observar cerca del ánodo, mientras que las proteínas de mayor peso molecular se observan más cerca de los pocillos.
Figura 01: Página SDS
La unión de SDS a la cadena polipeptídica es proporcional a su masa molecular relativa. Por lo tanto, la masa molecular también se puede determinar a través de la página SDS. La tinción de los geles de SDS Page se realiza mediante tinción con azul de bromofenol. Las aplicaciones de la página SDS varían en mayor medida donde se puede utilizar para estimar la masa molecular relativa y para determinar la abundancia relativa de proteínas en una mezcla de proteínas. La página SDS también se puede utilizar para determinar la distribución de proteínas en una mezcla de proteínas. La página SDS también se aplica para purificar y evaluar proteínas. Se utiliza como procedimiento preliminar para la hibridación y la transferencia Western, que a su vez se utiliza para la identificación y el mapeo de proteínas.
¿Qué es la página nativa?
La electroforesis en gel de poliacrilamida nativa (Native Page) utiliza un gel no desnaturalizante. Por lo tanto, no se agrega SDS o cualquier otro agente desnaturalizante a la matriz de gel. En Native Page, la separación de proteínas se basa en la carga y el tamaño de la proteína. Por tanto, la movilidad de la proteína depende de la carga y el tamaño de la proteína.
La carga de la proteína depende de las cadenas laterales de los aminoácidos. Si las cadenas laterales están cargadas negativamente, la proteína recibirá una carga negativa general y viceversa. Las proteínas conservan una conformación tridimensional debido al plegado que se produce. El plegamiento es el resultado de varios tipos de enlaces en proteínas, como enlaces disulfuro, interacciones hidrofóbicas y enlaces de hidrógeno. Por lo tanto, si la Page nativa se lleva a un pH neutro, las proteínas se separarán de acuerdo con la forma molecular de la proteína. Por tanto, Native Page se puede utilizar como una técnica sensible para detectar el cambio en la carga o conformación de la proteína.
La principal ventaja de la página nativa es que la proteína utilizada para el análisis de la página se puede recuperar en su estado original después del análisis de la página, ya que la proteína no se altera durante el proceso. Native Page es una técnica de rendimiento relativamente alto y la estabilidad de la proteína aumenta.
Figura 02: Página nativa
Una vez completada la ejecución del gel, el gel de Native Page puede verse teñido con azul de bromofenol o cualquier otro reactivo de tinción adecuado. Las aplicaciones de Native Page incluyen la separación de proteínas ácidas que incluyen glicoproteínas como la eritropoyetina recombinante humana o la identificación de proteínas presentes en la albúmina de suero bovino (BSA).
¿Cuáles son las similitudes entre la página SDS y la página nativa?
- Tanto los sistemas SDS Page como Native Page utilizan gel de poliacrilamida como matriz del gel.
- Ambos se utilizan para la separación e identificación de proteínas.
- Ambos usan movilidad electroforética para separar los compuestos.
- Ambos se pueden hacer de manera vertical u horizontal (generalmente se hacen como configuraciones de página verticales porque la longitud de ejecución es mayor).
- El aparato de electroforesis que incluye el tanque de gel, los peines, la fuente de alimentación es necesario para el funcionamiento de ambas técnicas.
- La visualización del gel se puede realizar mediante métodos de tinción en ambas técnicas.
¿Cuál es la diferencia entre la página SDS y la página nativa?
Diferencia del medio del artículo antes de la mesa
Página SDS vs página nativa |
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| SDS Page o dodecil sulfato de sodio Page separa las proteínas en función de su peso molecular y utiliza un gel desnaturalizante. | Native Page utiliza geles no desnaturalizantes y separa las proteínas según su tamaño, carga y forma (conformación 3D). |
| Tipo de Gel | |
| Se utiliza un gel desnaturalizante en la página SDS. | Se utiliza un gel no desnaturalizante en la página nativa. |
| Presencia de SDS | |
| SDS está presente como detergente para impartir una carga negativa en la muestra en la página SDS. | SDS no está presente en la página nativa. |
| Base de separación | |
| La separación de proteínas depende del peso molecular de la proteína en la página SDS. | La separación depende del tamaño y la forma de la molécula de proteína en la página nativa. |
| Estabilidad de la proteína | |
| La estabilidad de la proteína es baja en la página SDS. | La estabilidad de la proteína es alta en la página nativa. |
| Recuperación de la proteína original | |
| No es posible porque está desnaturalizado en la página SDS. | Posible en la página nativa. |
Resumen: página SDS frente a página nativa
SDS Page y Native Page son dos tipos de técnicas de electroforesis en gel de poliacrilamida que se utilizan para separar proteínas. La página SDS se trata con un detergente llamado SDS. El SDS imparte una carga negativa general a la proteína, que luego da como resultado la desnaturalización de la proteína. Por tanto, las proteínas se separan en función de su peso molecular. Por el contrario, la técnica de la página nativa no utiliza ningún agente desnaturalizante. Por lo tanto, las proteínas se separan según su tamaño o su forma. Ésta es la diferencia entre la página SDS y la página nativa.
