Diferencia clave: página SDS frente a Western Blot
El Western Blot es una técnica que detecta una proteína específica de una muestra de proteína. Esta técnica se realiza mediante varios pasos clave: electroforesis en gel, transferencia e hibridación. La electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (página SDS) es un tipo de técnica de electroforesis en gel que se utiliza para separar las proteínas según su tamaño (pesos moleculares). Western blot es una hoja especial de una membrana de transferencia que se utiliza para transferir el mismo patrón de proteínas en la página de SDS. La diferencia clave entre SDS Page y western blot es que SDS Page permite la separación de proteínas en una mezcla, mientras que el western blot permite la detección y cuantificación de una proteína específica de una mezcla. Ambos son útiles en estudios de análisis de proteínas.
CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia clave
2. Qué es la página SDS
3. Qué es Western Blot
4. Comparación lado a lado: página SDS frente a Western Blot
5. Resumen
¿Qué es la página SDS?
SDS Page es una técnica de electroforesis en gel utilizada para la separación de proteínas. Se usa comúnmente en bioquímica, genética, medicina forense y biología molecular. Una vez extraídas las proteínas de la muestra, se procesan en un gel compuesto por SDS y poliacrilamida. El SDS es un detergente aniónico que se utiliza para linealizar proteínas (desnaturalizar proteínas) y para impartir una carga negativa a proteínas linealizadas proporcional a su masa molecular. La poliacrilamida se convierte en el soporte sólido del gel. Las proteínas desnaturalizadas que están cargadas negativamente migran hacia el extremo positivo del aparato a través del gel. De acuerdo con los tamaños de las proteínas, las velocidades de migración difieren entre las proteínas y se produce la separación. Por lo tanto, la página SDS es útil para la separación de proteínas individuales en función de sus tamaños.
La preparación del gel de poliacrilamida para el fraccionamiento de proteínas es un paso crucial en SDS Page. La correcta concentración de poliacrilamida y el tipo de reticulante utilizado afectan fuertemente las propiedades físicas del gel, lo que hace la separación real de las diferentes proteínas. Los tamaños de los poros del gel deben manejarse adecuadamente para una separación efectiva. Sin embargo, SDS Page se considera una técnica de separación de proteínas de alta resolución.
La técnica de la página SDS tiene una limitación importante en el análisis de proteínas. Dado que el SDS desnaturaliza las proteínas antes de la separación, no permite la detección de actividad enzimática, interacciones de unión a proteínas, cofactores de proteínas, etc.
Figura 01: Página SDS
¿Qué es Western Blot?
La técnica de transferencia Western permite la detección de una proteína específica a partir de una mezcla de proteínas y la medición de la cantidad y el peso molecular de la proteína. Western blot es la membrana utilizada durante el procedimiento de transferencia para obtener la imagen especular de los patrones de proteínas en el gel de poliacrilamida-SDS. La membrana que se utiliza para la transferencia Western se compone principalmente de nitrocelulosa o difluoruro de polivinilideno (PVDF). La membrana con la proteína transferida se puede utilizar para identificar la proteína deseada. Requiere anticuerpos de alta calidad para la detección de la proteína deseada por hibridación. El anticuerpo se une a su antígeno específico y revela la presencia del antígeno deseado, que es una proteína.
La transferencia de las proteínas del gel de poliacrilamida SDS al western blot se realiza mediante electrotransferencia. Es un método eficaz y rápido que hace que las proteínas salgan por electroforesis del gel y pasen a la membrana de nitrocelulosa (western blot).
Figura 02: Western Blot
¿Cuál es la diferencia entre SDS Page y Western Blot?
Diferencia del medio del artículo antes de la mesa
Página SDS vs Western Blot |
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| SDS Page es una técnica de electroforesis en gel. | Western blot es una técnica que se realiza en una membrana para detectar una proteína específica de una mezcla. |
| Utilizar | |
| La página SDS permite la separación de proteínas según sus tamaños. | Western blot permite la transferencia de proteínas en el gel de la página SDS sin cambiar su patrón y permite la hibridación con anticuerpos específicos. |
| Desventajas | |
| La desnaturalización de las proteínas, el alto coste y la presencia de sustancias químicas neurotoxinas son las desventajas de esta técnica. | Esta técnica lleva mucho tiempo y requiere un buen personal experimentado y unas condiciones controladas específicas. |
Resumen: página SDS frente a Western Blot
La página SDS y el western blot son dos métodos implicados en el análisis de proteínas. La página SDS permite una fácil separación de las proteínas en un gel según su peso molecular. Western blot ayuda a confirmar la presencia y cantidad de una proteína específica mediante la hibridación con anticuerpos específicos. Ésta es la diferencia entre SDS Page y western blot.
